转基因小鼠

制作转基因小鼠最常用的⼀种方法是DNA原核显微注射。DNA原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内，注射DNA整合到小鼠受精卵的基因组中，并稳定遗传给后代。

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转基因小鼠

转基因小鼠 - 基因编辑动物模型

转基因小鼠

转基因小鼠是通过基因工程技术，将外源基因导入小鼠基因组并稳定遗传的基因编辑动物模型，可实现基因过表达、功能增益等研究需求，广泛应用于生命科学、疾病机制研究、药物研发与药效评价等领域；与传统基因敲入模型不同，转基因小鼠多为随机插入外源基因，制备周期短、应用场景广，赛业生物可依托PiggyBac成熟技术体系提供各类定制化转基因小鼠模型构建服务。

赛业生物可提供哪些转基因小鼠定制服务？

围绕外源基因表达、基因功能调控和疾病机制研究需求，赛业生物可提供过表达转基因、microRNA转基因、RNAi转基因、可诱导性/组织特异性转基因及BAC转基因小鼠定制服务。

项目可结合外源片段、启动子、表达组织或诱导方式设计载体，并衔接原核显微注射、小鼠鉴定及后续繁育支持；需要进一步确认模型表现时，还可安排表型分析。

过表达转基因小鼠

通过构建广泛性、组织特异性、诱导性等不同的启动⼦和目的基因的表达载体，利⽤原核显微注射的方法将线性化后的表达载体注射到小鼠受精卵中，实现转基因在广泛性、组织特异性等特定条件下的表达。

microRNA转基因小鼠

构建两种microRNA表达载体，通过原核显微注射将载体注射到受精卵中，实现microRNA过表达或者下调。

RNAi转基因小鼠

通常采用U6/H1驱动shRNA表达，设计靶序列构建shRNA载体，利⽤原核显微注射的方法将shRNA载体注射到受精卵中。在基因表达的过程中，通过shRNA的⼲扰作用，达到对目的基因表达的沉默抑制，实现基因功能的研究。

可诱导性/组织特异性转基因小鼠

将构建的广泛表达启动子-loxp-stop-loxp-转基因载体通过显微注射制备组织特异性转基因小鼠模型，转基因在正常情况下并不表达，只有与相应的组织特异性表达Cre/CreERT2小鼠杂交后，因Stop终⽌序列在特定的组织中被去除，从⽽达到转基因在诱导性/特定组织中特异性表达的目的。

BAC转基因小鼠

BAC是处理大片段DNA的重要工具，由于其完整性和保真度，可以更好的解释转基因的重要功能。因此，为了研究完整的时空特异性基因表达、基因结构及调控元件等，可以将BAC直接进行原核显微注射（约几十到几百Kb）或者将其改造后注射在小鼠或大鼠的受精卵中，以获得转基因鼠。

转基因小鼠建系原则与流程

1. 获得F0代小鼠：原核显微注射获得PCR阳性F0代杂合子小鼠，每只F0为独立谱系，单独繁殖。

2. 繁育获得F1代：F0代小鼠8周性成熟后与野生型小鼠交配，获得F1代小鼠。

3. 基因型鉴定：对F1代进行基因型鉴定，理论上50%为转基因杂合子，50%为野生型。

注意事项：

每只F0代鼠基因型不同，不可自交，只能与野生型交配筛选F1。
F1鼠需进行蛋白表达鉴定，优先筛选表达鼠再传代保种。

PiggyBac（PB）高效转基因技术

利用PB转座子“剪切和粘贴”机制，使DNA片段在载体和基因组之间“自由”的转移，从而有效介导外源DNA片段对基因组的整合。转座时，转座酶有效的识别特异的转座子序列（ITRs），与转座子末端结合形成短暂的发夹结构，“剪切”后脱离，“粘贴”至基因组的TTAA位点。赛业实验数据表明，PiggyBac系统基因表达阳性率为常规质粒DNA显微注射的2倍以上！